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1. 基本原理 傳統(tǒng)PCR:
傳統(tǒng)PCR是一種用于擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)。它通過在熱循環(huán)過程中反復(fù)進(jìn)行變性、退火和延伸三個(gè)步驟來實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增。擴(kuò)增后的產(chǎn)物在電泳后通過膠體可視化觀察。 熒光PCR:
熒光PCR是實(shí)時(shí)PCR的一個(gè)變種,它通過在PCR反應(yīng)中同時(shí)進(jìn)行熒光信號的監(jiān)測來實(shí)現(xiàn)對DNA擴(kuò)增的實(shí)時(shí)定量分析。使用特定的熒光染料(如SYBR Green或TaqMan探針)來標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物,熒光信號的強(qiáng)度與DNA的量成正比。 2. 檢測方法 傳統(tǒng)PCR:
通過電泳(如瓊脂糖凝膠電泳)在擴(kuò)增后進(jìn)行產(chǎn)物檢測,通常需要額外時(shí)間進(jìn)行電泳分離和成像。 熒光PCR:
在PCR反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號,能夠在每個(gè)循環(huán)結(jié)束時(shí)獲取數(shù)據(jù),實(shí)時(shí)顯示擴(kuò)增曲線,無需后續(xù)電泳步驟。 3. 數(shù)據(jù)分析 傳統(tǒng)PCR:
數(shù)據(jù)分析通常依賴于目視觀察擴(kuò)增帶的條帶(如大小和強(qiáng)度),定量分析相對復(fù)雜,通常需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。 熒光PCR:
使用專門的軟件分析熒光信號,能夠計(jì)算出基因的起始量(Cq值),定量分析更為精準(zhǔn)和簡單,且可以生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。 4. 靈敏度和特異性 傳統(tǒng)PCR:
靈敏度和特異性依賴于引物設(shè)計(jì)和擴(kuò)增條件,可能存在非特異性擴(kuò)增的問題。 熒光PCR:
由于使用了熒光探針或染料,能夠提供更高的靈敏度和特異性,減少非特異性擴(kuò)增的干擾。 5. 應(yīng)用領(lǐng)域 傳統(tǒng)PCR:
多用于基本的DNA擴(kuò)增、克隆、突變分析和某些診斷應(yīng)用。 熒光PCR:
廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、微生物定量檢測、遺傳變異檢測、病原體檢測等領(lǐng)域,特別是在需要高靈敏度和定量分析的場合。 6. 設(shè)備要求 傳統(tǒng)PCR:
需要基本的PCR儀和電泳設(shè)備。 熒光PCR:
需要配備實(shí)時(shí)PCR儀,能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測熒光變化,設(shè)備相對昂貴。 |


